طراحی و ساخت bcg نوترکیب حاوی ژن سیتوزین دآمیناز به منظور ارتقا کارایی bcg اینتراوزیکال در درمان سرطان مثانه

زمینه و اهداف: سرطان مثانه دومین سرطان شایع دستگاه ادراری- تناسلی در جهان است. ایمونوتراپی با bcg درمان انتخابی این سرطان می باشد. روش دیگر، ژن درمانی سرطان مثانه با سیستم (cytosine deaminase/5-fluorocytosine (cd/5-fc است. هدف از ساخت شاتل وکتور مایکوباکتریال، انتقال ژن سیتوزین دآمیناز (cd) به bcg با روش الکتروپوریشن بود تا با تبدیل 5-fc به 5-fluorouracil)5-fu) توسط آنزیم cd، سلول های توموری بیشتری نابود شوند. روش بررسی: قطعات ژنی شاتل وکتور مایکوباکتریال شامل، پروموتر hsp60، توالی سیگنال آلفا آنتی ژن و ژن cd مخمر (saccharomyces cerevisiae) پس از تکثیر با pcr و هضم آنزیمی و با استفاده از فناوری های کلونینگ در پلاسمید pbtggt و pvn2 به ترتیب کلون و ساب کلون شدند. پلاسمید نهایی با روش الکتروپوریشن به داخل bcg هدایت گردید و وجود آن در bcg بررسی شد. یافته ها: نتایج تعیین توالی وکتور نهایی صحت آن را تایید و وکتور phara نامگذاری شد. سلول هایی که phara را دریافت کردند پس از 17 روز روی محیط میدل بروک 7 h10 حاوی غلظت نهایی 20 mg/ml کانامایسین، کلنی تشکیل دادند. نتیجه گیری: bcg نوترکیب فوق علاوه بر فراخوانی موضعی سیستم ایمنی، با تبدیل داروی 5-fc به 5-fu توسط آنزیم cd، می تواند سلول های توموری بیشتری را نابود نماید